DNA
DNA又称去氧核糖核酸,是染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料。有时被称为“遗传微粒”,因为在繁殖过程中,父代把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播。DNA是十分庞大的生物分子。病毒含有几千到几十万个核苷酸,原核生物的DNA分子平均为1E6个碱基对,真核生物的DNA分子可达lE9个碱基对。按每个基因平均为1个碱基对进行粗略的计算,大肠杆菌约有3-4个基因,而人类细胞的基因数目可高达2万个。虽然其中某些基因,特别是真核细胞内的一些基因是多拷贝的,在基因组内有多个甚至极多个重复,实际基因数要比上述推算的基因数要少得多。尽管如此,原核细胞和真核细胞基因组内的基因数目仍然是极为惊人的。
人工合成
由于研究某些基因或者某种蛋白的生理作用,例如生理活性等,因此,需要通过人工实验的方法合成一段全基因序列。
有效方法
经过基因工程学工作者艰苦细致的探索研究,人们现在已经掌握了分离和制造目的基因的一些有效方法。一般来说,目前获取目的基因的方法主要有三种:反向转录法、从细胞基因组直接分离法和人工化学合成法,这些方法都有一个前提,就是已有文献报道所研究的目的基因的蛋白序列或者基因的序列。
、反向转录法
这种方法主要用于分子量较大而又不知其序列的基因,它以目的基因的mRNA为模板,设计上下游引物,借助反转录酶合成碱基互补的DNA片段,即cDNA,再在DNA聚合酶的作用下合成双链cDNA,亦即目的基因的双链DNA。
、基因组扩增法
利用基因组抽提试剂盒,可以从细胞、植物、血液、动物组织中直接分离基因组,设计特异扩增的引物,利用抽提的基因组为模版,直接PCR扩增,以获取目的基因。
、人工合成
依照某一蛋白质的氨基酸序列,或基因序列,设计全长引物,利用OVERLAP方法形成模版DNA,再利用PCR扩增的方法得到双链DNA,然后将PCR产物转化克隆至克隆载体或者表达载体中。化学合成全基因目前是准确率最高,速度最快的方法,同时可以依据密码子在不同宿主细胞的偏爱性和不同的实验需求,设计基因序列,提高表达水平。
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